洛科ROCKER儀器讓過(guò)濾更簡(jiǎn)單!
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細(xì)胞培養(yǎng)與廢液抽吸
細(xì)胞培養(yǎng)繼代流程
廢液抽吸方法的比較
細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)設(shè)備
廢液處理與廢棄辦法
廢液抽吸 (aspiration / suction) 是現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)中常用的技術(shù),用以移除細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)作的廢棄液體。
生物學(xué)中常見的細(xì)胞培養(yǎng),是將真核或原核細(xì)胞培養(yǎng)于適宜的培養(yǎng)液 (culture medium) 環(huán)境中,使其在受控制的狀態(tài)下生長(zhǎng) (growth) 及增殖 (proliferation)的過(guò)程。 細(xì)胞培養(yǎng)的流程包含解凍細(xì)胞、培養(yǎng) (cell culture)、繼代培養(yǎng) (俗稱分盤,cell subculture) 及冷凍細(xì)胞等步驟。
而在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生代謝物、細(xì)胞碎片等廢棄物影響細(xì)胞健康,甚至導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。 因此在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,需定期更換培養(yǎng)液,而移除舊有培養(yǎng)液、洗滌液的行為,則為廢液抽吸。
真空廢液抽吸裝置 (suction system, aspiration system) 常見如上圖,主要包含:
連接并啟動(dòng)真空泵后,細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿中的廢液會(huì)因壓力差而被抽吸、收集至真空瓶,緩沖瓶則做為防溢裝置使用,以避免廢液被抽吸至真空源內(nèi)。 過(guò)濾器可使用HEPA濾膜(High Efficiency Particulate Air filter 或 0.22 μm過(guò)濾器,以過(guò)濾掉廢液及空氣中的粒子、確保抽吸的效率。
▲ 細(xì)胞培養(yǎng)前,請(qǐng)確認(rèn)作環(huán)境符合無(wú)菌作條件,且應(yīng)避免和細(xì)菌實(shí)驗(yàn)共享設(shè)備,以防污染。
a. 附著型細(xì)胞 (adherent cell),又稱貼壁培養(yǎng)、單層培養(yǎng) (monolayer culture)
b. 懸浮型細(xì)胞 (suspension cell),又稱懸浮培養(yǎng) (suspension culture)
廢液抽吸目前有多種方法可以進(jìn)行。 早期實(shí)驗(yàn)室多利用移液器(pipette)或電動(dòng)吸管抽吸廢液,然而因?yàn)樾枰貜?fù)抽吸及排除液體,長(zhǎng)時(shí)間使用下來(lái)易造成手部不適及疲勞。 除此之外,電動(dòng)吸管須搭配無(wú)菌刻度吸管使用,而現(xiàn)多使用拋棄式吸管排除污染疑慮,因此一次實(shí)驗(yàn)下來(lái)通常會(huì)產(chǎn)生大量廢棄物,造成環(huán)境負(fù)擔(dān)。
現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室則普遍會(huì)自行購(gòu)置真空泵搭配真空瓶自行組裝,如此會(huì)較電動(dòng)吸管有效率,且設(shè)備取得較容易,然而自組式系統(tǒng)常見許多例如:管線配置不良,造成工作環(huán)境混亂、或是玻璃吸管經(jīng)常破裂等安全性上的缺點(diǎn)。
Lafil 廢液抽吸系統(tǒng)及 BioDolphin 廢液抽吸套件主要為生命科學(xué)細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)過(guò)程中溶液抽吸應(yīng)用,可直接放置于無(wú)菌無(wú)塵作臺(tái) (laminar flow) 使用。 Lafil 廢液抽吸系統(tǒng)整合真空源、真空瓶與廢液抽吸套件,提供實(shí)驗(yàn)室一體化解決方案,更比傳統(tǒng)廢液抽吸系統(tǒng)減少一半臺(tái)面占用面積,并使用圍籬式平臺(tái)固定真空瓶,避免作者不小心碰觸瓶身而傾倒。
洛科Lafil 廢液抽吸系統(tǒng)及 BioDolphin 廢液抽吸套件
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實(shí)驗(yàn)室電動(dòng)吸管 |
自組真空抽吸系統(tǒng) |
洛科廢液抽吸系統(tǒng) | |
Lafil 100 |
Lafil 200 | |||
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整合式設(shè)計(jì) |
是,單一產(chǎn)品 |
否 |
是,一體化all-in-one設(shè)計(jì) | |
抽吸耗材 |
無(wú)菌刻度吸管 |
吸管尖 (tip) |
吸管尖 (tip) | |
長(zhǎng)時(shí)間作 |
易造成手部肌肉疲勞 |
易造成手部肌肉疲勞 |
符合人體工學(xué)、單手退tip設(shè)計(jì) | |
吸力調(diào)節(jié) |
無(wú) |
有 |
無(wú) |
有 |
廢液清除 |
每次抽吸排凈 |
吸取至真空瓶滿后清除 |
吸取至真空瓶滿后清除 | |
真空瓶 |
無(wú) |
通常為 1 L 抽氣瓶 |
1 L PP瓶 |
4 L PP瓶 |
泵/設(shè)備保護(hù) |
無(wú) |
無(wú) |
有 | |
廢液溢漏危險(xiǎn) |
無(wú) |
高風(fēng)險(xiǎn) |
無(wú) | |
置入無(wú)菌作臺(tái) |
可 |
不可 |
可 |
不可 |
空間利用性 |
體積小 |
管路雜亂占空間 |
可省去自組系統(tǒng)50~65%空間 | |
環(huán)境友善 |
易產(chǎn)生大量拋棄式廢棄物 |
易產(chǎn)生大量拋棄式廢棄物 |
所有配件采用耐高溫高壓滅菌材質(zhì),另有節(jié)能安靜的eco機(jī)種 | |
特殊需求 |
無(wú) |
無(wú) |
Lafil 200:支持2人同時(shí)抽吸 |
無(wú)菌作臺(tái),或生物安全柜 |
無(wú)菌作臺(tái)可作為實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的無(wú)菌工作區(qū),同時(shí)也可遏止各種于微生物實(shí)驗(yàn)程序中可能產(chǎn)生的傳染性飛濺物或氣膠。 |
培養(yǎng)箱 |
使用培養(yǎng)箱的目的是為細(xì)胞生長(zhǎng)提供舒適的環(huán)境。 培養(yǎng)箱可通過(guò)控制溫度、濕度和二氧化碳濃度提供細(xì)胞適合的生長(zhǎng)條件。 |
廢液抽吸系統(tǒng) |
使用廢液抽吸系統(tǒng),可以更輕松地從細(xì)胞培養(yǎng)容器中吸除培養(yǎng)基和試劑。 |
光學(xué)顯微鏡 |
光學(xué)顯微鏡是細(xì)胞培養(yǎng)不可或缺的工具,如正立顯微鏡、倒立顯微鏡。 其將細(xì)胞可視化,以監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情形、細(xì)胞形態(tài)、計(jì)數(shù)與識(shí)別污染物質(zhì)。 |
低溫存儲(chǔ)設(shè)備 |
隨著傳代次數(shù)的增加,連續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞可能會(huì)出現(xiàn)遺傳不穩(wěn)定性,如遺傳漂變、哀老; 因此將它們保存在低溫儲(chǔ)存設(shè)備中以供長(zhǎng)期儲(chǔ)存是細(xì)胞培養(yǎng)中重要的步驟。 |
水浴器 |
細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室普遍會(huì)將水浴槽設(shè)置為37 oC,用于預(yù)熱培養(yǎng)基以及解凍冷凍細(xì)胞或試劑等。 |
含有危險(xiǎn)化學(xué)品(如氯)之有機(jī)廢液應(yīng)收集至設(shè)有適當(dāng)標(biāo)示之專用廢液桶,不含危險(xiǎn)化學(xué)品之其它廢液可一并收集于一般混合廢液桶,廢油則需收集于廢油桶中。 細(xì)胞培養(yǎng)用的廢液應(yīng)加入適當(dāng)濃度的消毒劑,如漂白水(次氯酸鈉Sodium Hypochlorite),使細(xì)胞致死,再倒入水槽或廢液桶。 培養(yǎng)皿等生物醫(yī)療相關(guān)廢棄物則應(yīng)置于生物醫(yī)療廢棄物袋中,進(jìn)行高溫高壓滅菌后以一般廢棄物丟棄,或是請(qǐng)依照我國(guó)生物醫(yī)療廢棄物相關(guān)規(guī)定處理。
參考資料